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SNAP-tag荧光探针——卵白标记so easy

宣布者:艾美捷科技    宣布时候:2021-06-16     
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SNAP-tagTM简介

O6-鸟(niao)(niao)嘌(piao)呤(ling)烷(wan)(wan)基(ji)(ji)-DNA烷(wan)(wan)基(ji)(ji)转移酶(O6-alkylguanine-DNA alky?ltransferase, AGT)是一(yi)种核卵白(bai)(bai),它经由(you)过程把烷(wan)(wan)基(ji)(ji)化(hua)DNA链(lian)(lian)上(shang)鸟(niao)(niao)嘌(piao)呤(ling)O6-位(wei)(wei)的(de)(de)(de)烷(wan)(wan)基(ji)(ji)转移至本身活性中(zhong)(zhong)间的(de)(de)(de)半胱(guang)氨酸上(shang),来利用(yong)DNA修复(fu)功效。洛桑理工(gong)学院(Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne)Kai Johnsson博士科研小(xiao)组发明,AGT能(neng)够(gou)或(huo)许(xu)特(te)同性并疾速(su)地与(yu)苯甲基(ji)(ji)鸟(niao)(niao)嘌(piao)呤(ling)(benzylguanine, BG)衍生(sheng)物产生(sheng)反映,以共价键连系。随后,研讨(tao)职员经由(you)过程对AGT停(ting)止(zhi)(zhi)渐变革(ge)新,取得了一(yi)种不与(yu)DNA链(lian)(lian)上(shang)的(de)(de)(de)鸟(niao)(niao)嘌(piao)呤(ling)停(ting)止(zhi)(zhi)反映的(de)(de)(de)卵白(bai)(bai),该卵白(bai)(bai)不再(zai)定(ding)位(wei)(wei)于细胞核中(zhong)(zhong),但与(yu)小(xiao)份子BG衍生(sheng)物的(de)(de)(de)亲和力却大大地进步,并且只(zhi)要22KDa巨细。此刻,研讨(tao)职员付与(yu)了它一(yi)个(ge)广(guang)为(wei)人知的(de)(de)(de)名字(zi)——SNAP-tag。

 

SNAP-tag的长处

SNAP-tag不管(guan)在体内仍是(shi)体外都能够(gou)或许特同性并疾速与BG衍(yan)生物(wu)产生特同性反映,以共价键连系。由于BG可带各类差别(bie)的别(bie)的化学基(ji)团,如生物(wu)素、荧光素(Fluorescein)、罗丹明(Rhodamine)等,从而完成一种标(biao)签卵白(bai)能够(gou)或许被(bei)多种配体标(biao)记,是(shi)一种反动性的自我标(biao)记卵白(bai)标(biao)签。

 

SNAP-tag巨细为22kDa,在(zai)良多罕见抒发(fa)系统(tong)中都能够(gou)或许杰出(chu)抒发(fa)。今朝为止,已有相称(cheng)数目和品种的卵(luan)白(bai)质作为N结(jie)尾和C结(jie)尾SNAP-tag融会卵(luan)白(bai)被(bei)胜利抒发(fa)出(chu)来。

 

SNAP-tagTM在卵白质标记中具备三大上风,能够或许普遍利用于卵白标签的各个利用范畴,是一种很是抱负的卵白标签。

                                                                          SNAP-tagTM的三大上风

上风具体内容
一个标签,多种标记免除构建融会卵白的烦琐操纵流程
尝试情况多样化能够或许在活细胞或撤除细胞的夹杂物中停止卵白标记,而后在SDS-PAGE胶上直接检测
尝试停顿可及时监测能够或许根据本身尝试请求增加探针,停止脉冲追踪成像检测
长处具体内容
高不变性SNAP-tagTM对正面基团替换的苯甲基鸟嘌呤进习惯切割,将替换性的苯甲基团体转移至活性位点并开释出自在鸟嘌呤,如斯取得的硫醚键具备高不变性;
高特同性由于苯甲基鸟嘌呤在生化情况中很是不变,并且不其余卵白质会与此类物资产生反映,是以这类自我标记具备很高的特同性;
标记的多样性SNAP-tagTM对能够或许毗连的化合物的性子,不严酷的限定,即SNAP-tagTM与苯甲基鸟嘌呤衍生物之间的连系反映不应受苯甲基鸟嘌呤是具备哪一种“二级标签”的影响,是以,SNAP-tagTM能够或许有多种配体,从而轻松完成标记的多样性。


SNAP-tagTM功效

SNAP-tagTM功效多样,能够或许利用于各类差别的研讨,首要包含:可在活细胞或细胞提取物中疾速标记融会卵白;可将卵白质共价牢固于固相介质外表,而无需停止之前的纯化任务;可与卵白酶共同,在把融会卵白牢固化后,纯化方针卵白,捕获卵白复合物;可直接在SDS-PAGE胶中检测SNAP-tagTM融会卵白。

SDS-PAGE胶中检测SNAP-tagTM融会卵白.png

 

SNAP-tagTM手艺道理

经由过程SNAP-tagTM(下图所示土黄色)与底物——苯甲基鸟嘌呤的特同性感化完成标记功程。SNAP-tagTM所带的活性巯基位点接管了苯甲基鸟嘌呤所照顾的侧链苯甲基基团,开释出了鸟嘌呤。这类新型硫醚键共价连系使SNAP-tagTM所照顾的方针卵白(图3所示蓝色)直接照顾上了苯甲基基团所带的标记物(下图所示绿色)。

 

SNAP-tagTM手艺道理.png

 

本期小艾给大师带来了艾美捷代办署理品牌,细胞骨架范畴领航者Cytoskeleton开辟的全光谱的SNAP-tag?* 底物——SiR 和 SPY? 标记的苯甲基鸟嘌呤 (BG)  。

 

这(zhei)些BG 衍生物的光谱集(ji)合在(zai)橙(cheng)色(se)和(he)远(yuan)白色(se)之间,BG 衍生物带有荧光标记(ji),细胞渗入性高,很(hen)是合适传统显(xian)微(wei)(wei)镜和(he)超分辩率显(xian)微(wei)(wei)镜。

 

BG 衍生物的光谱.jpg

 

除标(biao)(biao)(biao)记(ji)细(xi)胞(bao)(bao)外表,SNAP-tag 标(biao)(biao)(biao)记(ji)还能(neng)够或(huo)许标(biao)(biao)(biao)记(ji)细(xi)胞(bao)(bao)外部布(bu)局或(huo)卵白(bai)质,包含细(xi)胞(bao)(bao)核、内(nei)质网、高尔基(ji)体(ti);但是(shi),这须要用(yong)细(xi)胞(bao)(bao)渗入(ru)性(xing)底物, 咱们的(de)(de)SiR和SPY?荧(ying)光(guang)是(shi)细(xi)胞(bao)(bao)渗入(ru)性(xing)的(de)(de),能(neng)够或(huo)许标(biao)(biao)(biao)记(ji)亚细(xi)胞(bao)(bao)布(bu)局,乃至是(shi)线粒体(ti)嵴外部的(de)(de)卵白(bai)质,同(tong)时(shi)SiR和SPY?荧(ying)光(guang)能(neng)够或(huo)许与 STED 和 SIM等超分辩率成(cheng)像(xiang)显微镜兼容,进(jin)一步加强了(le)SiR和SPY?荧(ying)光(guang)的(de)(de)适用(yong)性(xing),特别是(shi)在阐发卵白(bai)质时(shi)空能(neng)源学时(shi),一旦细(xi)胞(bao)(bao)不变抒发融(rong)会 SNAP 标(biao)(biao)(biao)签,就能(neng)够或(huo)许被(bei)咱们的(de)(de)BG 衍(yan)生物标(biao)(biao)(biao)记(ji)上了(le)。

SNAP-tag 标记.jpg

 

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艾美捷(jie)科(ke)技与(yu)国(guo)际(ji)(ji)外优异的生物(wu)试剂供(gong)给商优坚持着(zhe)紧(jin)密(mi)亲(qin)密(mi)的协作干系,今朝已成为浩(hao)繁国(guo)际(ji)(ji)着(zhe)名品牌的中国(guo)总代(dai)办(ban)署理(li)或(huo)一(yi)级代(dai)办(ban)署理(li),首要包含:AmyJet、AAT Bioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Biosensis、Biovision、BioVendor、Caisson Labs、Cell Biolabs、Cytoskeleton、Demeditec、Duchefa、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、Fitzgerald、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、ImmunoStep、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Lumiprobe、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、Solis BioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、SySy、US Biological、TRC等,能够或(huo)许在短时候内(nei)为用(yong)户供(gong)给专业的前沿(yan)资讯、完整的产物(wu)及物(wu)流(liu)办(ban)事。

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