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份子生物学经常利用溶液配制

宣布者:艾美捷科技    宣布时候:2021-05-24     
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一、份子生物学经常利用储存液的配制


1.30%丙烯(xi)酰胺溶液

【配制体(ti)(ti)例】将 29g 丙烯酰胺和 1g N,N’-亚(ya)甲双丙烯酰胺溶于(yu)整体(ti)(ti)积为(wei)(wei) 60ml的水(shui)(shui)中。加热至 37℃消融之,补加水(shui)(shui)至终(zhong)体(ti)(ti)积为(wei)(wei) 100ml。用(yong)滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌,查(cha)证该溶液的 pH 值应不大于(yu) 7.0,置棕色瓶(ping)中保管于(yu)室温。


【注重】丙烯酰胺具备很强的神经毒性并能够经由过程皮肤接收,其作器具积累性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可以为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨严操纵,由于它还能够会含有少许未聚合资料。一些价钱较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺凡是含有一些金属离子,在丙烯酰胺储存液中插手约莫 0.2 体积的单床夹杂树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌留宿,而后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。在储存时期,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会迟缓转化成丙烯酰和双丙烯酸。


 2.40%丙烯酰胺

【配制体例】把(ba)380g 丙烯酰(xian)(xian)胺(an)(DNA 测序级(ji))和20g N,N’-亚甲(jia)双丙烯酰(xian)(xian)胺(an)溶(rong)于整(zheng)体积为 600ml 的(de)蒸馏水(shui)中。持续按(an)上述(shu)配制 30%丙烯酰(xian)(xian)胺(an)溶(rong)液(ye)的(de)体例处置(zhi),但(dan)加(jia)热消(xiao)融(rong)后应(ying)以(yi)蒸馏水(shui)补足至终体积为 1L。


【注重】见上述配制 30%丙烯酰胺的申明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定 。


3.放线菌素D溶液

【配制体例】把 20mg 放线菌素 D 消融于 4ml 100%乙醇中,1:10 浓缩储存液,用 100%乙醇作空缺对比读取 OD440 值。放线菌素 D(份子量为 1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21,900,故而 1mg/ml 的放线菌素 D 溶液在 440nm 处的吸光值为 0.182,放线菌素 D 的储存液应放在包有箔片的试管中,保管于-20℃。


【注重】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在透风橱内操纵,而不能在开放在尝试桌面长停止,严防吸入药粉或让其打仗到眼睛或皮肤。药厂供给的作医治用处的放线菌素 D 成品常含有糖或盐等增加剂。只需经由过程丈量储存液在 440nm 波利益的光接收肯定放线菌素 D 的浓度,这类成品便可用于按捺本身指导感化。


4.0.1mol/L腺苷三(san)磷酸(ATP)溶液

【配制体例】在 0.8ml 水中消融 60mg ATP,用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0,用蒸馏水定容 1ml,分装成小份保管于-70℃


5.10mol/L乙酸酰溶液

【配制体例】把 770g 乙酸酰消融于 800ml 水中,加水定容至 1L 后过滤除菌。


6.10%过硫酸铵溶液

【配制体例】把 1g 过硫酸铵消融于终量为 10ml 的水溶液中,该溶液可在 4℃保管数周。


7.BCIP溶液

【配制体例】把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)消融于 10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保管于 4℃


8.2×BES缓冲盐溶液

【配制体例】用整体积 90ml 的蒸馏水消融 1.07g 盐溶液 BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4,室温下用 HCl 调理该溶液的pH 值至 6.96、而后插手蒸馏水定容至 100ml,用 0.22μm 滤器过滤除菌,分装成小份,保管于-20℃。


9.1mol/LCaCl2溶液

【配(pei)制体例(li)】在200ml 蒸馏(liu)水中消融(rong) 54g CaCl2·6H2O,用(yong)0.22μm 滤器(qi)过滤除菌(jun),分装成(cheng) 10ml 小份储存于-20℃。


【注重】制备感触感染态细胞时,掏出一小份冻结并用蒸馏水浓缩至 100ml,用 Nalgene滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌,而后骤冷至 0℃。


10.2.5mol/LCaCl222溶液

【配制体例】在 20ml 蒸馏水中消融 13.5g CaCl2·6H2O,用 0.22μm 滤器过滤除菌 ,分装成 1ml 小份储存于-20℃。


11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液

【配制体例】用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液(pH5.2)消融 3.09g DTT,过滤除菌后分装成 1ml 小份储存于-20℃。


【注重】DTT 或含有 DTT 的溶液不能停止高压处置。


12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液


【配制体例】把每种 dNTP 消融于水至浓度各为 100mmol/L 摆布,用微量移液器接收0.05mol/l Tris 碱别离调理每dNTP溶液的pH 值 7 .0(用 pH 试纸检测 ),把中和后的每种 dNTP 溶液各取一份作恰当浓缩,鄙人表中给出的波长下读取光密度计较出每种 dNTP 的现实浓度,而后用水浓缩成终浓度为 50mmol/L 的dNTP,分装成小份储存于-70℃。比色杯光径为 1cm 时,吸光度=εM


13.0.5mol/lEDTA(pH8.0)溶液

【配制体例】在800ml 水中插手 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H2O),在磁力搅拌器上猛烈搅拌,用 NaOH 调理溶液的 pH 值至 8.0(约需 20g NaOH颗粒)而后定容至 1L,分装后高压灭菌备用。


【注重】EDTA 二钠盐需插手 NaOH 将溶液的 pH 值调至靠近 8.0,能力完整消融。


14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)


【配制体例】在 100ml 水中插手 1g 溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完整消融,而后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保管于室温。


【注重】谨慎:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,利用含有这类染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。


15.2×HEPES缓冲(chong)盐溶(rong)液

【配制体例】用总量为 90ml 的蒸馏水消融 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027gNa2PO4·2H2O、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES,用 0.5mol/l NaOH 调理 pH 值至 7.05,再用蒸馏水定容至 100ml。用 0.22μm 滤器过滤除菌,分装成 5ml 小份,储存于-20℃。


16.IPTG溶液

【配制体例】IPTG 为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(份子量为 238.3),在 8ml 蒸馏水中消融 2g IPTG 后,用蒸馏水定容至 10ml,用 0.22μm 滤器过滤除菌,分装成 1ml 小份储存于-20℃。


17.1mol/L乙酸镁溶液

【配制体例】在 800ml 水中消融 214.46g 四水乙酸镁,用水定容至 1L 过滤除菌。


18.1mol/LMgCl2溶液

【配制体例】在 800ml 水中消融 203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至 1L,分装成小份并高压灭菌备用。


【注重】MgCl2 极易潮解,应选购小瓶(如 100g)试剂,启用新瓶后勿持久寄存 。


19.β-巯基乙醇(BME)溶液

【配制体例】普通获得的是 14.4mol/L 溶液,应装在棕色瓶中保管于 4℃。

【注重】BME 或含有 BME 的溶液不能高压处置。


20.NBT溶液

【配制体例】把 0.5g 氯化氮蓝四唑消融于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保管于4℃。


21.酚/氯仿溶液

【配制体例】把酚和氯仿等体积夹杂后用 0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几回以均衡这夹杂物,置棕色玻璃瓶中,上面笼盖等体积的 0.01mol/l Tris·HCl(pH=7.6)液层,保管于 4℃。

【注重】酚侵蚀性很强,并可引发严峻灼伤,操纵时应戴手套及防护镜,穿防护服。一切操纵均应在化学透风橱中停止。与酚打仗过的部位皮肤利用大批的水洗濯,并用番笕和水洗濯,忌用乙醇。


22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

【配制体例】用异丙醇消融 PMSF 成 1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份储存于-20℃。若有须要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的储存液(100mmol/L)。

【注重】PMSF 严(yan)峻侵(qin)害呼(hu)吸(xi)道粘膜(mo)、眼睛及(ji)皮(pi)肤(fu),吸(xi)入、吞(tun)进(jin)或经由过程皮(pi)肤(fu)接收(shou)后有(you)致命风险。一旦(dan)眼睛或皮(pi)肤(fu)打仗(zhang)了 PMSF,应(ying)当即用大批(pi)水冲刷之。凡(fan)被PMSF 净化的衣物应(ying)予抛(pao)弃。

PMSF 在水溶液中不不变。应在利用前从储存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF 在水溶液中的活性损失速度随 pH 值的下降而加速,且 25℃的失活速度高于 4℃。pH 值为 8.0 时,20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期约莫为 85min,这标明将 PMSF 溶液调理为碱性(pH>8.6)并在室温安排数小时后,可宁静地予以抛弃。


23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

【配制体例】在800ml 蒸馏水中消融 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和 0.24gKH2PO4,用 HCl 调理溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L,在 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌 20min。保管于室温。


24.1mol/L乙酸钾(pH=7.5)溶液

【配制体例】将 9.82g 乙酸钾消融于 90ml 纯水中,用 2mol/L 乙酸调理 pH 值至7.5 后插手纯水定容到 1L,保管于-20℃。


25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)

【配制体例】在 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中插手 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水,即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液。


26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液

【配制体例】在 80ml 水中消融 408.1g 三水乙酸钠,用冰乙酸调理 pH 值至 5.2或用稀乙酸调理 pH 值至 7.0,加水定容到 1L,分装后高压灭菌。


27.5mol/LNaCl溶液

【配制体例】在 800ml 水中消融 292.2g NaCl 加水定容至 1L,分装后高压灭菌。


28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

【配制体例】在 900ml 水中消融 100g 电泳级 SDS,加热至 68℃助溶,插手几滴浓盐酸调理溶液的 pH 值至 7.2,加水定容至 1L,分设备用。

【注重】SDS 的微细晶粒易分散,是以称量时要戴面罩,称量终了后要断根残留在称量任务区和天平上的 SDS,10%SDS 溶液不必灭菌。


29.20×SSC溶液

【配(pei)制体例】在(zai)800ml 水中消融 175.3g NaCl 和 88.2g 柠檬酸钠,插手数滴 10mol/lNaOH 溶液调(diao)理 pH 值(zhi)至(zhi) 7.0,加水定(ding)容至(zhi) 1L,分装(zhuang)后高压灭(mie)菌。


30.20×SSPE溶液

【配制体例】在 800ml 水中消融 17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O 和 7.4g EDTA,用 NaOH 溶液调理 pH 值至 7.4(约需 6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至 1L,分装后高压灭菌。


31.100%三氯乙酸溶液(ye)

【配制体例】在装有 500g TCA 的瓶中插手 227ml 水,构成的溶液含有 100%(M/V)TCA。


32.1mol/LTris溶液

【配制体例】在 800ml 水中消融 121.91g Tris 碱,插手浓 HCl 调理 pH 值至所需值 。pHHCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml应使溶液冷至室温前方可最初调定 pH 值,加水定容至 1L,分装后高压灭菌。


【注重】如 1mol/L 溶液显现黄色,应予抛弃并置备品德更好的 Tris。虽然多品种型的电极均不能精确丈量 Tris 溶液的 pH 值,但仍可向大大都厂商购得适合的电极。Tris 溶液的 pH 值因温度而异,温度每下降 1℃,pH 值约莫下降 0.03 个单元。比方:0.05mol/L 的溶液在 5℃、25℃、和 37℃时的 pH 值别离为 9.5、8.9 和 8.6。


33.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/lTris)

【配制体例】在800ml 蒸馏水中消融 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 碱,插手 0.015g酚并用 HCl 调至 pH 值至 7.4,用蒸馏水定容至 1L,分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min,于室温保管。


34.X-gal溶液

【配制体例】X-gal 为 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D 半乳糖苷。用二甲基甲酰胺消融 X-gal 配制成的20mg/ml 的储存液。保管于一玻璃管或聚丙烯管中,装有 X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被粉碎,并应储存于-20℃。X-gal 溶液不必过滤除菌。


二、经常利用抗生素溶液

a:以乙醇为溶剂的抗生素溶液不必除菌处置。一切抗生素溶液均应放于不透光的容器保管。

b:镁离子(zi)是四环(huan)素(su)的(de)(de)拮抗(kang)剂,四环(huan)素(su)抗(kang)性菌的(de)(de)挑选应利用不含镁盐的(de)(de)培(pei)(pei)育基(如(ru)LB 培(pei)(pei)育基)。


三、经常利用的电泳缓冲液


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