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总RNA的提取( Trizol 法提取 )

宣布者:艾美捷科技    宣布时候:2021-06-08     
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在搜集到生(sheng)物资(zi)料以(yi)(yi)后(hou),最好(hao)能马上停(ting)止 RNA 制备(bei)任务。若需临时贮存,则应(ying)以(yi)(yi)液氮将(jiang)生(sheng)物资(zi)料缓(huan)慢冷冻后(hou),贮存于-80℃冷冻柜。在制备(bei) RNA 时,将(jiang)贮存于冷冻柜的(de)资(zi)料掏出,当即以(yi)(yi)插手(shou)液氮研磨的(de)体例突破细胞,不能够(gou)先行冻结 ,以(yi)(yi)防止 RNase 的(de)感(gan)化。


1.提取(qu)构造(zao) RNA 时,每(mei)50~100mg 构造(zao)用 1ml Trizol 试剂对(dui)构造(zao)停(ting)止裂解(jie);提取(qu)细(xi)(xi)胞 RNA 时,先(xian)离心积(ji)淀细(xi)(xi)胞,每(mei) 5-10 ╳106 个细(xi)(xi)胞加 1ml Trizol 后,频频用枪(qiang)奏乐或(huo)猛烈振荡以裂解(jie)细(xi)(xi)胞;


       2.将上述构造或细胞的Trizol 裂解液转入EP管中,在室温15~30C下安排 5 分钟 ;


3. 在上述 EP 管中,根据每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量插手氯仿,盖上 EP管盖子,在手顶用力震动 15 秒,在室温下(15℃~30℃)安排 2~3 分钟后,
12000g(2℃~8℃)离心 15 分钟;


4. 取下(xia)层水(shui)相置(zhi)于新(xin) EP管中,根据每 1ml TRIZOL加(jia) 0.5ml 异丙(bing)醇的量插(cha)手异丙(bing)醇,在室(shi)温下(xia)(15℃~30℃)安(an)排 10 分钟(zhong),12000g(2℃~8℃)离心 10 分钟(zhong) ;


5.弃上清 ,根据(ju)每 1ml TRIZOL 加 1ml 75%乙醇进 行洗濯,涡(wo) 旋夹(jia)杂,7500g(2℃~8℃)离心 5 分钟(zhong),弃上清;


6. 让积淀(dian)的 RNA 在室温下天然枯燥;


7.用 Rnase-free water 消融(rong) RNA 积淀。



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