地方棋牌

接待您拜候武汉艾美捷科技无限公司官方网站!
站点舆图 办事热线:400-6800-868
  • 产物
  • 文章

TECHNICAL COLUMN

进修资本

以后地位:地方棋牌 > 进修资本

组卵白提取

宣布者:艾美捷科技    宣布时辰:2021-06-08     
分享到:

组卵白(bai)(bai)有四品种型(xing):H2A、H2B、H3、H4,组卵白(bai)(bai)是(shi)染色体根(gen)基布局(ju)卵白(bai)(bai),因富(fu)含碱性(xing)(xing)氨基酸(suan) Arg 和 Lys 而呈(cheng)碱性(xing)(xing),可与(yu)酸(suan)性(xing)(xing)的 DNA 慎密(mi)连系。由于组卵白(bai)(bai)是(shi)偏碱性(xing)(xing)的,是(shi)以咱(zan)们能够利用酸(suan)法来提取(qu)。


尝试操纵步骤:


1、将 3-5×105 个细(xi)胞种(zhong)到 6 孔板中,接(jie)着停止本身(shen)须要的尝试处置,处置竣事后起头收卵白,先用 1×PBS 将细(xi)胞洗两次(ci),每次(ci)吸(xi)尽(jin)上清。


2、每孔插手 200ul NETN 裂(lie)(lie)解液,冰上裂(lie)(lie)解 15min


High salt NETN buffer


母(mu)液

配制 100ML


20mM Tris,PH=8.0

1M

2ml


500mM NACL

5M

10ml


0.5% NP-40

20%

2.5ml


1mM EDTA

0.5M

200ul


H2O


85.3ML


临用前加卵白酶按捺剂





3、用细胞(bao)(bao)刮刮细胞(bao)(bao),将(jiang)细胞(bao)(bao)搜集于 1.5mlEP 管中(zhong),1500g,4℃,离心 10min


4、离(li)心(xin)竣(jun)事(shi)后能够在(zai)管底看到一(yi)(yi)小(xiao)团靠(kao)近(jin)通明的积(ji)淀(dian),谨慎(shen)吸(xi)尽上清,用 1ML NETN buffer 洗积(ji)淀(dian)一(yi)(yi)次或两次,1500g,4℃,离(li)心(xin) 10min


5、吸(xi)尽上清,谨慎吸(xi),积淀轻(qing)易被吸(xi)走,插手 0.2M HCL 100ul (浓(nong)盐酸(suan)的(de)浓(nong)度为 12M)冰水裂(lie)解 30min,(30min 后积淀变成一个红色的(de)小团块)


6、12000RPM,4℃,15min 离心,此时组卵白已消融在上清中(zhong)(zhong),将上清转移到新的(de) EP 管中(zhong)(zhong),插(cha)手(shou) 20ul 的(de) 1M Tris ph=8.0 中(zhong)(zhong)和酸性(xing)(5 倍体(ti)积的(de) HCL 加 1 倍体(ti)积的(de) 1M Tris PH=8.0, 如(ru) 100ul 的(de)上清中(zhong)(zhong),可插(cha)手(shou) 20ul 的(de) 1M Tris。


若中和不充实,则(ze)鄙人一步插手 SDS 的(de)时辰溶(rong)液(ye)会显现黄色(se),可适当(dang)补加(jia) 1M Tris PH=8.0,只到(dao)溶(rong)液(ye)规(gui)复(fu)蓝色(se))。


7、可用考马斯法测卵白浓度


8、用 SDS 煮卵(luan)白(bai),100℃,10min.。接上(shang)去可停止 Western blot 尝试(shi)。


9、跑胶(jiao)时(shi),上样(yang)量为 5ug 时(shi)比拟适合(he)。能够(gou)按(an)照本(ben)身的(de)详细(xi)尝试(shi)停止调(diao)剂。


手艺专栏分类
比来促销 MORE
特点产物 MORE
现货产物 MORE
  • 高品德保证 进步前辈(bei)的出产研发手艺
  • 高性价比 价(jia)宜质优,性价(jia)比高
  • 100%保证 从采办(ban)到利用(yong),安心无忧
  • 宁静运输 完美的掩护(hu)办法宁静(jing)运输

微信(xin)扫码(ma)在(zai)线(xian)客服

微信(xin)征询

天(tian)下收(shou)费手艺(yi)撑持

400-6800-868

在线客(ke)服